十二、传染性海绵状脑病(2)

但在新疫区或新发病群,确诊还必须进行有关的实验室诊断,如动物感染试验、PrP??的免疫学检测及痒病相关纤维(SAF)检查等。

1.动物感染试验

至今尚无可供检测朊病毒的细胞培养系统,只能使用动物做生物学测定。小鼠和仓鼠是最常用的实验动物。

将被检标本(脑、脊髓、脾等)匀浆做10倍稀释(8~10个稀释度),通常每个稀释度脑内接种6只小鼠(30μL)或仓鼠(50μL)。接种后每3d检查一次,濒死时扑杀取其脑做组织病理学检查。原代分离观察期,小鼠为1年或更久,仓鼠为7~8个月。最后根据动物发病和死亡数计算终点滴度(ID和LD??)。脑匀浆的终点滴度一般为每克脑组织10?~1011LD??。

2. PrP??的免疫学检测

PrP??只见于患传染性海绵状脑病的人和动物,而健康和患其他疾病的人和动物中的PrP??可被蛋白酶消化清除,不会干扰PrP??的检测。

因此,PrP??的检测是TSE的特异诊断方法,现已被WTO的TSE专家会议所确认。它不仅可用于死后的组织病理学检查,还可用于活体检测(脑、扁桃体)做生前诊断。PrP??虽不能使感染宿主产生特异抗体,但对非易感动物的兔却可产生抗他种动物PrP的抗体,以此抗体与被检材料(脑组织)做免疫(western)印迹检测,可检测其中的PrP??。

3.痒病相关纤维(SAF)检查

SAF检查也是TSE的特异诊断方法,在被检材料不适合做组织病理学检查时尤为重要。通常以冰冻保存的脑和脊髓作为被检材料。

取1~10g被检材料,以10%(m/V)N-月桂酰肌氨酸溶液制备匀浆后,将抽提物在超速离心机上以22 000 g离心10 min,540 000 g 离心20 min,540 000 g离心25 min,沉淀物以蛋白酶K(PK10μg/mL,37℃,1h)处理,然后悬浮于50μL蒸馏水,负染后做电镜检查。

4.单克隆抗体

在朊病毒病诊断上已广泛应用,以各种特异的单克隆抗体可区分小鼠、仓鼠和人的PrP??。最近又制备了只与各种动物PrP??共有位点而不与PrP?反应的特异单克隆抗体,应用此单克隆抗体时,标本无需蛋白酶K处理即可检测。

【防控】

由于本病的特殊性(潜伏期长、发病缓慢、无免疫应答),一般的防控措施无效。

对没有发生过本病的国家和地区,在输入种羊后发现本病,有必要全部淘汰并销毁(焚化或深埋)。

若有的种羊已分至另一些羊群,应将这些羊群封锁隔离,观察3.5年,观察期间发现病羊,可做同样处理。羊舍消毒可用次氯酸钠,有效氯浓度应不低于5×10ˉ? mg/L,作用时间不少于1h。

用绵羊痒病病羊制成的骨肉粉饲喂牛和水貂等动物,可使其发生传染性海绵状脑病。

痒病朊病毒还可能使人致病,在国外一些研究痒病的人员中曾发现一种称为多发性脑脊髓硬化病,将死于该病的人脑组织接种冰岛绵羊,可发生一种与痒病无法区别的疾病。